養細胞的寶子們，收到細胞后先別著急處理細胞，花5分鐘仔細閱讀....

1、對于復蘇細胞

① 請按照說明書提前準備好基礎培養基、血清、因子、胰酶、雙抗，不要隨意更改培養條件，提前將生物安全柜進行酒精消毒和紫外滅菌。

② 收到細胞后，若發現培養瓶破損、漏液、培養基渾濁或污染，請拍照后及時聯系我們。

③ 細胞在37℃培養箱中靜置2-3小時，在倒置顯微鏡下確認細胞狀態，給細胞（100倍×2張，200倍×2張）以及培養瓶（外觀×1張）拍照留存，售后時肯定需要提供。

④ 瓶內充液培養基（運輸培養基）不能再用來培養細胞，需按照說明書上的培養條件配制新鮮完全培養基培養細胞。

⑤ 鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，收集全部充液培養基，250g離心5分鐘，棄去培養瓶中充液培養基，用新鮮配制的完全培養基重懸未貼壁的細胞，將細胞鋪瓶至新的T25細胞培養瓶，補齊完全培養基至6mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，立刻對細胞進行傳代處理。

注：在快遞運送過程中細胞因振動會造成脫落現象，不論繼續培養還是傳代，未貼壁的細胞均需離心回收。

⑥ 收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 ，保種1支，另外1支傳代至T25新瓶，前3代建議均采用1:2傳代，若細胞明顯達到對數期，1:2傳代后第二天就長滿，則可提高傳代比例，采用1:3傳代，前面代次建議代代保種，以妨出現問題后無種可用。

⑦ 由于細胞在運輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時間顛簸，收到細胞進行傳代后，建議前3-5代培養條件可適當提高血清含量以促進恢復細胞原有狀態并縮短到達對數期的時間。

⑧ 市面上血清魚龍混雜，假血清（BSA或替代物冒充血清）、劣質血清（小牛冒充胎牛）、水貨（國產冒充進口）屢見不鮮，若客戶培養細胞過程中明顯感覺細胞生長速度不及預期，且無法更換血清，建議酌情提高血清含量來彌補血清質量的缺陷，以期提高細胞生長速度。

⑨實驗結束后，將臺子內的細胞放回培養箱，試劑放回冰箱，最后噴灑Deeming實驗室安全衛士，預防微生物污染，關閉生物安全柜，打開紫外滅菌30分鐘以上。

√特別提醒：

1.復蘇的細胞千萬千萬別放冰箱，冷凍冷藏都不可以，這是活細胞，不是試劑，切記！！！

2.由于大部分的細胞系比較容易培養，以致于”問題血清“不能被及時發覺，但部分細胞對于血清品質有嚴格要求，用“問題血清“培養細胞極易造成細胞脫落、死亡，務必要擦亮眼睛，選擇靠譜的血清供應商。

2、對于凍存細胞

① 收到快遞后，若發現凍存管破損、箱內已無干冰，請拍照后及時聯系供貨商。

② 收到細胞后請盡快復蘇，給凍存管（外觀×1張）拍照留存，隔天在倒置顯微鏡下確認細胞狀態，給細胞（100倍×2張，200倍×2張）拍照，售后時需提供。

③ 復蘇細胞時不可直接將凍存管丟進水浴鍋，用鑷子夾住凍存管頂部，將凍存管下部浸入水中即可，由于水浴鍋處于實驗室暴露、高溫、濕潤環境，極易滋生各種微生物，建議在水浴鍋中加入Deeming水浴鍋安全衛士抑制各類微生物的滋生，最大程度上防止水浴鍋中的微生物對凍存細胞造成的污染。

④ 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作，凍存管、試劑、耗材拿進去之前一定要用75%酒精消毒，培養試劑盡量不要共用，若有共用試劑，建議配成完培后整體過濾除菌。

⑤ 原代細胞傳代建議T25培養瓶1:2傳代 ，保種1支，另外1支傳代至T25新瓶，前面代次建議代代保種，以妨出現問題后無種可用，原代細胞需根據生長狀況判斷傳代比例。

⑥ 第一次傳代時需要摸索消化時間，建議每隔30s就觀察一次，并記錄消化時間，細胞會隨著后期傳代次數的增多而延長消化時間。

⑦ 由于細胞在運輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時間顛簸，收到細胞進行復蘇后，前1-2代培養可適當提高血清含量以促進恢復細胞原有狀態并縮短到達對數期的時間。

⑧ 原代細胞建議選用廠家供應的專用培養基，否則可能會因為改變培養條件，大大縮短細胞的培養代數，造成種子細胞的浪費。

⑨ 及時更換和補充培養箱水盤內的水，建議加入Deeming細胞培養箱水盤安全衛士進行污染物的預防。

⑩ 購買的細胞僅供科研使用，不得用于人體或其他！！！！