什么是胎牛血清？

    采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段，血中含有豐富的生長發(fā)育因子，非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng)。一旦胚胎發(fā)育完全，這些因子自動消失。因此，8個月胎齡以上的牛胚胎，已接近足月，不能作為胎牛血清的原料來使用。

胎牛血清的使用要點(diǎn)

1.初次開封胎牛血清如何化凍？

胎牛血清常規(guī)儲存溫度為-20℃，如果更加長期保存可以-80℃保存。解凍的時候不建議直接放在常溫中（25-37℃）解凍，很容易產(chǎn)生絮狀沉淀，進(jìn)而有可能影響血清品質(zhì)。建議的方式為先由-20/-80℃轉(zhuǎn)移到4℃解凍，全部為液體后，再由4℃轉(zhuǎn)移到室溫。在解凍的過程中，需要隨時晃動，使血清內(nèi)成分和溫度混合均勻，有助于減少沉淀的產(chǎn)生。解凍后，就可以把血清用15 mL或者50 mL無菌離心管分裝凍存啦，可以根據(jù)自己使用血清的頻率在4℃存放一管已化凍分裝的血清，方便經(jīng)常配制培養(yǎng)基，在4℃也不可以存放太久，最好在一個月內(nèi)用完。解凍后的胎牛血清不可以在37℃或者室溫存放太久，避免血清中重要的細(xì)胞生長因子失活而影響細(xì)胞狀態(tài)。

2.血清的用量
原則上血清添加量不宜太多，通常添加5%、10%、20%。大部分細(xì)胞正常培養(yǎng)使用10%的血清濃度，部分細(xì)胞原代提取時使用20%血清。具體某一株細(xì)胞適應(yīng)的血清濃度，需要根據(jù)細(xì)胞特性、實(shí)驗(yàn)?zāi)康拿鳌?/span>

3.胎牛血清什么時候需要熱滅活？
這就涉及到什么是熱滅活。熱滅活一般是以56℃，30 min來處理已解凍的血清，因?yàn)榇思訜岵襟E，可以使補(bǔ)體去活化，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有：溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。除了這些特殊實(shí)驗(yàn)要求，常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)需要熱滅活嗎？通常來說，熱滅活對大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)都不是必須進(jìn)行的步驟，經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長作用很小，甚至可能會因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低，沉淀物增多等不好的影響。

4.更換血清的正確步驟。
養(yǎng)細(xì)胞的小伙伴經(jīng)常會遇到同一個細(xì)胞需要更換血清的情況。如果將另一款血清配制的培養(yǎng)基直接用于細(xì)胞培養(yǎng)，可能會發(fā)現(xiàn)以前增殖很快的細(xì)胞突然變慢甚至逐漸脫壁死亡了。這種情況下，多數(shù)為細(xì)胞被以往的培養(yǎng)環(huán)境馴化，突然更換一個新的營養(yǎng)環(huán)境，哪怕是品質(zhì)更好的血清，也可能會出現(xiàn)不適應(yīng)的情況。通常來說，更換血清的時候我們會遵循梯度更換保證細(xì)胞可以適應(yīng)。血清開始使用時，如果是重新復(fù)蘇細(xì)胞，建議用原培養(yǎng)體系進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后再進(jìn)行測試。測試時不建議直接100%換成新血清體系進(jìn)行培養(yǎng)，應(yīng)按照比例梯度替換。例如，首次換液按照新舊體系1:3，第二次換液1:1，第三次換液3:1，而后完全替換。針對一些對培養(yǎng)體系較為敏感的細(xì)胞，需進(jìn)一步細(xì)化替換比例。

5.血清解凍以后出現(xiàn)了懸浮物是什么？還能繼續(xù)用嗎？

解凍以后如果發(fā)現(xiàn)有少量乳白色的絮狀或者點(diǎn)狀物質(zhì)，這種主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量，可用400×g離心5 min取上清。不會對細(xì)胞有太大的影響。

圖解凍后出現(xiàn)的絮狀沉淀

6.血清在使用前是否需要對血清進(jìn)行過濾？
一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾，切勿直接過濾血清。

7.使用血清培養(yǎng)細(xì)胞以后，鏡下觀察到會動的“小黑點(diǎn)”會是污染嗎？

如果您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，黑點(diǎn)是否做不規(guī)則游動。如果細(xì)胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：

(1)細(xì)胞生長過程中自然破碎后的細(xì)胞殘??；

(2)血清中的雜蛋白，可能是反復(fù)凍融的結(jié)果；

(3)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應(yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn)；

(4)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

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