細胞名稱：NCI-N87+luc 人胃癌細胞熒光素酶標記

貨號：WS-0080（STR（MDA-MB-231鑒定））

規格：1×10?cells/T25培養瓶

細胞介紹

NCI-N87細胞表達表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG 72, 并且沒有左旋多巴胺脫羧酶(DDC)活性。它們的血管活性的腸肽(VIP)受體活性極低并缺乏胃泌激素受體。 它們表達蕈毒堿膽堿受體。沒有證據表明存在N-myc, L-myc, myb和EGF受體基因的重組。這個細胞株表達的c-myc和c-erb-B 2 RNA水平與其它細胞株相當。以下基因不表達: N-myc, L-myc, c-cis, IGF-2, 或胃泌激素釋放肽。據報道NCI-N87 細胞的植板率為4.3%。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

一、細胞特性

1） 來源：胃癌，肝轉移

2） 形態：上皮細胞樣；貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、細胞篩選

該細胞為穩定轉染Luc的細胞，隨細胞傳代次數的增加，其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。        

建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養基維持培養，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養基繼續篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養基培養，至細胞密度約80%，可繼續加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養基正常培養。

三、運輸和保存 

干冰運輸及復蘇好存活細胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。 

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。 

四、培養基及培養凍存條件準備 

1）  準備1640 （推薦WS-P-0001）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%;GlutaMAX-1谷氨酰胺1%;Sodium Pyruvate丙酮酸鈉1%  

注意事項：該細胞貼壁較慢，且生長緩慢，建議復蘇、傳代后讓細胞貼壁48h后再進行后續實驗操作。細胞最初將附著形成小島狀，然后在這些密集的斑塊中增殖，因此很難正確估計匯合度。避免細胞過密生長，及時更換新鮮培養基，以免培養基的pH受到不利影響。該細胞培養時，在培養基中會有一些漂浮細胞和碎片，并且在該細胞中可能會觀察到較大的“囊泡”和顆粒狀外觀，是正常現象。                                                                     

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養方式以隨貨說明書為準！！！！

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

四、傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：

1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上完全培養基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加完全培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基，細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。

4、收到細胞后，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯系。