細胞名稱:MDA-MB-436 人乳腺癌細胞

貨號：WS60141（STR鑒定）

規格：1×10?cells/T25培養瓶

細胞介紹

 該細胞源于一名43歲患有乳腺腺癌女性的胸腔積液，細胞呈多形性，大多數細胞在間接免疫熒光染色時呈現與抗微管抗體的強烈反應。

一、細胞特性

1） 來源：人，女性，乳腺腺癌胸水轉移灶

2） 形態：有多核成分的多形細胞，貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運輸和保存 

干冰運輸及復蘇好存活細胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。 

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。 

三、培養基及培養凍存條件準備 

1） 準備L15 （推薦WS-P-0009）培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗1%；谷胱甘肽（還原型）16ug/ml；  胰島素 0.01mg/ml。

2)注意事項：

a． 該細胞不能用胰酶消化，傳代時，使用細胞刮鏟輕輕把細胞刮下來。抽出細胞液離心后傳到新的培養瓶中。

b． L-15培養基配方設計用于與大氣進行自由氣體交換。使用該培養基進行培養時應使用空氣100%。CO 2和空氣混合物對細胞有害。如果沒有條件準備空氣氣相100%的培養箱的，可以采用不透氣密封蓋的T25培養瓶來培養，培養過程中每天將細胞拿出培養箱換1-2次空氣。

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養方式以隨貨說明書為準！！！！

3）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

4）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

四、傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一)如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：

1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上完全培養基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加完全培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基，細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。

4、收到細胞后，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯系。