細胞名稱:NK-92MI 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞

貨號：WS60155（STR鑒定）

規格：1×10?cells/T25培養瓶

細胞介紹

NK-92細胞是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株IL-2依賴型NK細胞株。NK-92MI細胞是轉染得到的源自NK-92細胞的IL-2非依賴的NK細胞株。親本細胞NK-92通過微粒體基因轉化法用逆轉錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA進行轉化。可能由于載體整合到基因組DNA中，轉化是穩定的。

這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562細胞和Daudi細胞。NK-92細胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標記陽性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標記陰性。

其親本IL-2依賴的細胞株NK-92細胞及另一株同樣來源于NK-92細胞株的IL-2非依賴的細胞株NK-92CI都可從ATCC得到。NK-92MI細胞和NK-92CI細胞這兩個變種都包含、表達并合成hIL-2cDNA。NK-92MI細胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而親本細胞不合成表達。1998年9月提交到ATCC的培養物污染了支原體，其后代通過BM細胞周期蛋白處理21天消除支原體。處理后6周，用Hoechst染色、PCR和標準培養測試進行支原體檢測，結果都呈陰性。

一、細胞特性

1） 來源：男 50歲 外周血

2） 形態：淋巴母細胞樣，懸浮生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運輸和保存 

干冰運輸及復蘇好存活細胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。 

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。 

三、培養基及培養凍存條件準備 

1） 準備MEMα (WS-P-0003)培養基＋0.2mM Inositol（肌醇 iCell-8050）＋0.1mM β-mercaptoethanol(β-巰基乙醇 iCell-8211)＋0.02mM Folic Acid（葉酸iCell-8080）＋12.5% HS(馬血清iCell-002b)+12.5%FBS(iCell-0500)+1%P/S(iCell-15140-122)

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養方式以隨貨說明書為準！！！！

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

四、傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一)如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：

1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上完全培養基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加完全培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基，細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。

4、收到細胞后，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯系。