細胞名稱:SK-N-BE(2) 人神經(jīng)母細胞瘤細胞

貨號：WS60180（STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞介紹

1972年11月從一們多次化療及放療的擴散性神經(jīng)母細胞瘤患兒骨髓穿刺物中建立了SK-N-BE(2)神經(jīng)母細胞瘤細胞株。 該細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。 有報道稱SK-N-BE(2)細胞的飽和濃度超過1x10^6細胞/平方厘米。細胞形態(tài)多樣，有的有長突觸，有的呈上皮細胞樣。 細胞會聚集，形成團塊并浮起。

一、細胞特性

1） 來源：腦,神經(jīng)母細胞瘤,骨髓轉(zhuǎn)移灶

2） 形態(tài)：神經(jīng)母細胞 半貼壁（貼壁和懸浮同時存在）生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運輸和保存 

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。 

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備 

1）  準備DMEM/F-12（推薦WS-P-0005）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。備注：該細胞細胞形態(tài)多樣，有的有長突觸，有的呈上皮細胞樣。 細胞會聚集，形成團塊并浮起。為貼壁和懸浮同時存在，換液和傳代時需要分別回收貼壁和懸浮細胞，否則細胞會越來越少。

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準！！！！

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一)如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上完全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯(lián)系。