細胞名稱:Bend.3 小鼠腦微血管內皮細胞株

貨號：WS20009（種屬鑒定）

規格：1×10?cells/T25培養瓶

細胞介紹

細胞轉染了表達多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉錄病毒載體。

一、細胞特性

1） 來源: BALB/c小鼠腦

2） 形態：內皮細胞樣  貼壁生長

3） 含量：>1x10^6 細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運輸和保存 

干冰運輸及復蘇好存活細胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。 

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。 

三、培養基及培養凍存條件準備 

1）準備DMEM ( 推薦GIBCO,貨號12800017，添加NaHCO3 1.5g/L) 培養基，優質胎牛血清，10%，雙抗 1%。

注意：（bEnd.3細胞對培養基pH值的任何不平衡都很敏感。使用配方含有3.7 g / L碳酸氫鈉的DMEM培養基培養細胞時為穩定培養基PH值，增加CO2是必要的，否則這些細胞不會很好地附著或增殖，細胞建議在空氣，90%、二氧化碳，10%環境中培養。經驗證在空氣，95%；二氧化碳，5%的環境下使用含1.5 g / L碳酸氫鈉的DMEM培養基會比較好，推薦使用含1.5 g / L碳酸氫鈉的DMEM培養基+優質胎牛血清10%來培養。

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養方式以隨貨說明書為準！！！！

1）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

2）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

四、傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一)如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：

1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上完全培養基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加完全培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基，細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。

4、收到細胞后，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯系。