細胞名稱：PC-9GR 人肺癌細胞（PC-9吉非替尼耐藥）

貨號：WS-0146a（STR鑒定）

規格：1×10?cells/T25培養瓶

用途：僅供科研使用

一、細胞特性

源自人肺腺癌，該肺組織仍處于分化狀態。PC-9（以前稱為PC-14）。PC-14 最初于1989 年作為源自人肺腺癌（未分化型）的細胞系存放在RIKEN生物資源中心。該生物資源中心通過短串聯重復序列 (STR) DNA 分析發現該細胞系與 PC-9 相同，PC-9 是源自人肺腺癌（分化型）的細胞系。此錯誤識別發生在細胞系存放在 RIKEN 生物資源中心之前。細胞系的名稱更改為 PC-9，以反映這一發現。該細胞吉非替尼耐藥。

1、來源：人，肺腺癌組織

2、形態：圓形和紡錘形混合，多數貼壁少量懸浮

二、培養基及培養凍存條件準備

1）準備DMEM 培養基；優質胎牛血清，10%；0.5ug/ml 吉非替尼；雙抗，1%。

  血清我們推薦 FBS500-WP-002

注：上皮樣細胞，多數貼壁，圓形細胞和梭形細胞同時存在。傳代凍存時請收集圓形懸浮細胞。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

三、 細胞處理

1） 凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。 

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

注意：細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至0.5ug/mL繼續培養；若此過程中細胞停止增殖，且狀態較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養基培養，至細胞密度約8×105個/mL，且生長狀態較好時，再更換為所需的DDP藥物濃度。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

注意：細胞凍存過程中，不可添加藥物。

2. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。